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二、DNA的琼脂糖凝胶电泳的应用和发展举例。要详细一点的。谢谢了。很急啊!
一、不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳的特点？
因为聚丙烯酰胺凝胶的浓度可以根据需要配制，所以可以形成连续体系和不连续体系两种电泳体系。“不连续系统”的特点是大大提高了样品分离的分辨率。这种电泳的主要特征是：
(1)使用两种不同浓度的凝胶体系；(2)用于制备两种凝胶的缓冲溶液的组成和pH是不同的，并且它们也不同于电泳槽中的电泳缓冲溶液。实验中电泳凝胶分为两层：上层为低浓度大孔凝胶，称为浓缩凝胶或分层凝胶，制备这一层的缓冲液为Tris-HCl，pH6.7；下层是高浓度的小孔胶，称为分离胶或电泳胶，成胶缓冲液为Tris-HCl，pH8.9，电泳槽中的电极缓冲液为Tris-甘氨酸，pH8.3，可见凝胶浓度、成胶成分、pH与电泳缓冲液体系不同，形成不连续体系。
在电泳过程中，蛋白质样品被置于浓缩的凝胶上。为了防止蛋白质样品在电极缓冲液中扩散，加入相同体积的40%蔗糖或50%甘油与之混合以提高密度。为了观察蛋白质样品的游动，在样品中加入溴酚蓝等微量染料。这些有色物质的分子游得比任何大分子物质都快。只要染料不从凝胶管中流出，就不存在样品从橡胶管中流出的危险。
在不连续体系中，当接通电源开始电泳时，体系中的甘氨酸、蛋白质、HCl中的氯离子和溴酚蓝解离成阴离子，离子流向阳极游动。它的迁移率取决于离子的电荷数、分子量和形状。但当电极缓冲液(pH8.3)中的甘氨酸离子进入浓缩凝胶时，遇到比pH8.3低的pH(6.7)，pH下降近两个单位，几乎接近甘氨酸的等电点(5.97)，于是甘氨酸的解离度突然降低，带电量明显减少，迁移率变慢。血清样本中的一种蛋白质成分也进入了浓缩凝胶。pH的变化虽然影响其解离度，但比甘氨酸小得多，迁移率比甘氨酸大。此外，浓缩凝胶的较大孔隙不会阻碍蛋白质分子。
浓缩凝胶中Tris-HCl中的Cl-完全解离，分子量小，摩擦小，迁移率比蛋白质和溴酚蓝快。于是形成了浓缩凝胶中各种离子的移动性：甘氨酸蛋白溴酚蓝。
甘氨酸分子进入浓缩凝胶后，解离度降低，导致可动离子电流突然丧失，电流和电导率下降。但是，整个电泳系统其他部分的电流保持不变。根据电导和电位梯度成反比的关系(E=I/n，E为电位梯度，I为电流强度，n为电导率)，在先导离子Cl-离子和慢离子甘氨酸离子之间突然形成一个较高的局部电位梯度。
在高电场的作用下，这种局部高电位梯度中的血清蛋白成分以不同的速度(不同分子量，不同电荷)向前快速游向Cl-离子区。到达前导Cl-区时，由于不缺离子，大电场强度减弱，离子移动速度迅速减慢。因此，甘氨酸和Cl-离子之间的蛋白质样品根据其分子大小堆积或浓缩成层。通过这一过程，蛋白质样品被浓缩了数百倍，蛋白质的成分按照一定的顺序层层排列。
当离子电流继续向前移动，进入用pH8.9缓冲溶液制备的微孔凝胶时，蛋白质分子在微孔凝胶中遇到阻力，迁移率变慢。同时，在pH8.9时，甘氨酸完全解离，电荷增加，消除了离子电流损失的现象，甘氨酸离子小分子赶上了蛋白质。凝胶的每一部分都以恒定的电场强度恢复，蛋白质的分离完全以一般的逐区方式进行。
从以上原理可以看出，聚丙烯酰胺凝胶不连续电泳的主要优点是蛋白质样品浓缩后，形成紧密压缩层，进入分离凝胶。蛋白质的组分预先分离，压缩成层，可以减少电泳时由于自由扩散造成的组分间重叠区带来的干扰，从而提高电泳的分辨率。由于这一优点，少量的蛋白质样品(1-100？g)也能很好的分离，分辨率高，使血清蛋白能获得近20条带。
二、DNA的琼脂糖凝胶电泳的应用和发展举例。要详细一点的。谢谢了。很急啊!
应用：
制备1、DNA。
适用于分离大片段DNA。
琼脂糖凝胶可以区分相差100bp左右的DNA片段，虽然分辨率低于聚丙烯酰胺凝胶，但易于制备，分离范围广，特别适用于分离大龙，建立批次，培养给定感觉片段的DNA。普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb，脉冲电泳可分离高达10^7bp的DNA片段。
在从青贮饲料中提取总DNA的实验中，采用琼脂糖凝胶电泳和紫外吸收法。提取的DNA纯度高，可直接用于下游分子操作。提取方法灵敏，能全面反映样品中微生物的本来面貌。
在“CTAB结合DNA凝胶回收试剂盒提取食用菌DNA”的实验中，研究人员采用了两种方法提取DNA: DNA一、CTAB法(对照法)。二、CTAB结合DNA凝胶回收试剂盒(琼威通首款产品铁良佐君尼需要脂肪糖凝胶DNA试剂盒)(结合法)。实验结果表明，与对照方法相比，联合方法提取的DNA样品电泳条带更规则清晰，DNA消化效率明显高于对照方法。因此，结合方法可以有效地从富含多糖的材料中分离纯DNA[2]。
可以提取大分子DNA。
在“洋葱伯克霍尔德氏菌HMW DNA的制备和限制性酶切”实验中提到，构建大片段基因组文库的关键是获得具有高颜色传递和冷致性的基因组DNA，其可以控制受损管的分子量。而使用成熟的商业试剂盒提取基因组DN，只能得到DNA扩展到娘门关A时大小约为20kb从单词中提取酶到极限需要很多次，但是很容易断裂基因组，很难获得大于300kb的基因组DNA。两种方法都无法达到目的，但经过研究人员的不懈研究，李力能够用琼脂糖凝胶提取基因组DNA，获得足够大的DNA片段，完全可以满足构建粘粒基因组文库的要求。在这个过程中，研究人员在用低熔点琼脂糖或普通熔点琼脂糖制备凝胶块的问题中选择了后者，因为低熔点琼脂糖价格昂贵，而且在制备纯原名的过程中凝胶块容易断裂，但普通熔点琼脂糖和低熔点琼脂糖在基因组DNA的制备中没有区别。
1、通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。
在基因组DNA的提取中，将DNA温育、提取和沉淀，用70%乙醇洗涤两次，然后用适量的双蒸水溶解。然后在1.0%琼脂糖凝胶上进行电泳，以1kb DNA梯为参照估算DNA溶液的浓度。具体检测方法如下：用2.0%琼脂糖做凝胶，6微升AFLP—PCR产物与1微升上样缓冲液混合后上样，再加1TBE电泳缓冲液，120V电泳50分钟。用EB溶液染色后，在凝胶成像系统(ChampGel-3200)上观察并拍照[4]。
2、琼脂糖在其他领域的应用
琼脂糖在免疫扩散法中的应用。
免疫扩散法是利用琼脂糖凝胶作为扩散介质，使抗原和抗体在琼脂糖凝胶中自由扩散并相遇，从而形成抗原抗体复合物。因为这种复合物的分子量增加，聚集，不会继续扩散，形成肉眼可见的带状或线状沉淀带。抗原抗体复合物的沉淀带是一种特异性的半透性屏障，可以阻止免疫学性质相近的抗原抗体分子通过，但允许那些性质不同的分子继续扩散，使不同抗原或抗体形成的沉淀带有自己的位置，从而使混合体系得以分离和鉴定。
琼脂糖凝胶用作扩散介质是因为一定浓度的琼脂糖凝胶内部具有多孔网络。而且孔径很大，可以让大分子物质(分子量从几十万到几百万)自由通过。因为大多数抗原和抗体的分子量都在20万以上，几乎可以在琼脂糖凝胶中自由扩散。而且琼脂糖凝胶具有化学稳定性好、含水量高、透明度好、来源方便、易于处理等优点，是免疫沉淀检测技术中最理想的扩散介质。
在双向琼脂扩散实验中，出于与上述相同的原因，琼脂或琼脂糖也被用作扩散培养基。
琼脂糖在双链DNA探针合成中的作用。
双链DNA探针的合成方法主要有切口翻译法和随机引物合成法。
缺口翻译法
影响缺口翻译反应的因素有几个：(a)产物的比活取决于[-32 P]dNTP的比活和模板中核苷酸的取代程度。(b)脱氧核糖核酸酶的用量和* * * *的质量。大肠杆菌DNA聚合酶会影响产物片段的大小。(c)DNA模板中的琼脂糖等抑制剂会抑制酶的活性，因此应使用精心纯化的DNA。
随机引物合成法
随机引物合成法也可以直接在低熔点琼脂糖中进行。
以上是琼脂糖凝胶在生物学各个领域的一些应用。然而，由于生物学研究的迅速发展，琼脂糖凝胶的应用可能会更广泛，它将在生物学研究中发挥其应有的作用。
发展实例：琼脂和琼脂糖由于其特殊的凝胶特性，特别是显著的稳定性、滞后性和滞后性，具有特殊的稳定作用，并且容易吸水；已广泛应用于食品、医药、化工、纺织、国防等领域。据不完全统计，琼脂和琼脂糖的用途有1000多种，在国际上被称为“东亚新产品”。在食品工业中，可用于生产：水晶软糖、异形软糖、水产品、肉罐头、果汁饮料、果肉饮料、米酒饮料、乳饮料、精品、乳蛋糕。
三、westernblot的原理及操作步骤，应用有哪些
Western Blot的原理与Southern blot杂交或Northern blot杂交相似，但Western Blot使用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，检测的对象是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”使用的是标记的二抗。将通过PAGE分离的蛋白质样品转移到固体载体(如硝酸纤维素膜NC膜)上。该固相载体以非共价键的形式吸附蛋白质，可以保持电泳分离的多肽种类及其生物活性不变。固体载体上的蛋白质或多肽作为抗原与相应的抗体反应，再与酶或同位素标记的第二抗体反应。通过电泳分离的特定靶基因表达的蛋白质组分通过底物显色或放射自显影来检测。这项技术也被广泛用于检测蛋白质的表达水平。蛋白质印迹染色的分类方法主要有以下几种：I .放射自显影ii .底物化学发光ECL。底物荧光ECF iv。底物DAB显色是常用的，包括底物化学发光ECL和底物DAB显色。第一种方法用于相同的水平和实验条件。目前，发表的文章通常使用底物化学发光ECL。买个现成的套件就行了，操作也比较简单。原理如下(第二抗体用HRP标记):反应底物是过氧化鲁米诺。如果遇到HRP，它就会发光，这样胶片就可以曝光，洗出条来。值得一提的是，“western blot”这个名字的由来非常有趣。一个叫Southern的科学家开始了印迹，但印迹的对象是DNA链，他称之为Southern blot。后来出现了两种类似的印迹方法，一种是针对RNA的，一种是针对蛋白质的。人们把这两种技术分别称为北方和西方，与这两种技术的发明者无关。
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